基因操作技术_PDF下载[60MB-百度云]汪峻主编

节选

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　　《基因操作技术（第2版）/21世纪高等职业教育规划教材·生物学系列》：　　b.单层培养细胞直接在培养板中加入Trizol裂解细胞，每10cm2面积（即3.5cm直径的培养板）加1mL，用移液器吸打几次。Trizol的用量应根据培养板面积而定，不取决于细胞数。Trizol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。　　c.细胞悬液离心收集细胞，每5×106～5×107个动物、植物、酵母细胞或1×107个细菌细胞加入1mLTrizol，反复吸打。加Trizol之前不要洗涤细胞，以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。　　②将匀浆样品在室温（15℃～30℃）下放置5min，使核酸蛋白复合物完全分离。　　③如样品中含有较多蛋白质、脂肪、多糖或胞外物质（肌肉、植物结节部分等），可于2℃～8℃，10000r·min—1离心10min，取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜、多糖、高相对分子质量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织时，上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。　　④每使用1mLTrizol加入0.2mL氯仿，剧烈振荡15s，室温下放置3mm。　　⑤于2℃～8℃，10000r·min—1离心15min。样品分为3层：底层为黄色有机相，上层为无色水相，另有一个中间层。RNA主要在水相中，水相体积约为所用Trizol试剂的60%。　　⑥把水相转移到新管中，如要分离DNA和蛋白质可保留有机相，进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1mLTrizol加入0.5mL异丙醇，室温下放置10min。　　……

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内容简介

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本书是为高职高专院校生物技术类专业编写的专业课教材, 系统而简洁地介绍了基因操作技术的基本原理、基本操作和实际应用。全书分为6个项目, 内容包括基因操作的基本过程、核酸的分离纯化技术、目的基因克隆技术、DNA体外重组技术、目的基因的表达与鉴定、生物信息技术。

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项目1 基因操作的基本过程任务1．1 基因操作的基本概念任务1．2 基因操作的基本过程项目小结复习思考题项目2 核酸的分离纯化技术任务2．1 核酸的结构与功能2．1．1 棱酸的化学结构2．1．2 DNA的结构与功能2．1．3 RNA的结构与功能2．1．4 核酸的理化性质任务2．2 基因与基因组2．2．1 基因概念的发展2．2．2 基因的结构特征2．2．3 染色体2．2．4 基因组任务2．3 基因组DNA的分离纯化2．3．1 植物组织基因组DNA的提取2．3．2 动物组织及血液中基因组DNA的提取2．3．3 线粒体DNA的提取：碱变性法提取缦粒体DNA2．3．4 细菌基因组DNA的制备，SDS法提取细菌总DNA2．3．5 病毒DNA的制备2．3．6 质粒DNA的分离纯化实训1 碱裂解法制备小量细菌质粒DNA任务2．4 RNA的分离纯化2．4．1 总RNA的分离纯化2．4．2 mRNA的分离纯化：oligo（dT）纤维素柱法任务2．5 核酸的检测与保存2．5．1 紫外分光光度法实训2 紫外分光光度法测定核酸含量2．5．2 凝胶电泳法实训3 琼脂糖凝肢电泳检测DNA2．5．3 桩酸的保存项目小结复习思考题项目3 基因克隆技术任务3．1 目的基因的扩增3．1．1 PCR基本原理3．1．2 PCR反应体系与编程3．1．3 引物设计3．1．4 常用PCR技术类型实训4 PCR扩增目的基因任务3．2 栽体及其改造3．2．1 常用载体3．2．2 常用工具酶实训5 质粒DNA的酶切实训6 琼脂糖凝胶中回收DNA片段项目小结复习思考题项目4 DNA体外重组技术任务4．1 重组DNA的构建4．1．1 黏性末端的连接4．1．2 平末端的连接4．1．3 人工黏性末端的连接4．1．4 人工接头法连接4．1．5 T／A克隆连接4．1．6 重组DNA构建应注意的事项实训7 DNA片段的连接任务4．2 重组DNA的转化4．2．1 重组质牲转化大肠杆菌4．2．2 重组DNA转染真棱细胞实训8 大肠杆菌感受态细胞的制备实训9 重组质粒的转化任务4．3 重组子的筛选与鉴定4．3．1 遗传学检测法4．3．2 DNA凝肢电泳检测法4．3．3 核酸分子杂交检测法4．3．4 免疫学检测法4．3．5 核酸序列分析法实训10 转化子的筛选与鉴定项目小结复习思考题项目5 目的基因的表达与鉴定任务5．1 基因表达调控原理5．1．1 原核生物基因表达调控机制5．1．2 真核生材基因表达调控机制任务5．2 目的基因的表达5．2．1 目的基因在原核系统中的表达5．2．2 目的基因在真核系统中的表达实训11 目的基因在大肠杆菌中的诱导表达任务5．3 目的蛋白的鉴定5．3．1 SDS—聚丙烯西胺凝肢电泳5．3．2 Western杂变5．3．3 等电聚焦电泳5．3．4 双向电泳实训12 SDS—PAGE检测表达蛋白质项目小结复习思考题项目6 生物信息技术任务6．1 生物信息学概念任务6．2 生物信息数据库6．2．1 基因和基因组数据库6．2．2 蛋白质数据库任务6．3 数据的查询与提交6．3．1 数据查询6．3．2 向Genbank提交序列数据6．3．3 序列文件格式任务6．4 序列比对与数据库搜索6．4．1 序列两两比对6．4．2 多序列比对6．4．3 数据库搜索项目小结复习思考题附录参考文献